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非损伤性胃内采样法用于诊断幽门螺杆菌感染 中华医学检验杂志 1998年第4期第0卷 论著摘要 作者：王礼文 杨学文 李克涓 陈亚军 王绍栋 单位：210029 南京，江苏省中医院检验科［王礼文、杨学文、李克涓、陈亚军、王绍栋(系镇江医学院实习生)］ 幽门螺杆菌(Hp)的检查，一般用内窥镜取胃粘膜组织作病理镜检、快速脲酶、培养及Hp基因检测等方法，取样有一定的损伤性，频繁的检查患者难以接受，现有13C和14C呼气试验的非损伤性检查方法，但价格昂贵，操作繁琐并有一定的放射性，为此，我们设计了一种无损伤性的简易线制采样具，用采样端的线团采集胃内标本，并用此做快速脲酶和PCR法检测Hp的16S rRNA基因，并与培养等方法的结果作对比，取得了良好效果。现将结果报告如下。 一、材料和方法 1.材料：(1)标本来源：需做胃内窥镜检查的胃病患者，嘱其在检查前2～3天，先做吞线团采样，再用内窥镜取胃粘膜组织，共收集双份标本56份。(2)自制采样检测药盒，由3部分构成：a.采样线(为一棉线制品，线一端由20根1 cm长的线组成，类似拖把状。经灭菌后，装入胶囊，线另一端于胶囊外90 cm长，胶囊内装NaHCO3药片0.25 g)。b.尿素培养基。c.取样小剪刀。 2.方法：(1)吞线采样检查法：嘱患者早晨空腹，温开水吞入采样胶囊，根据患者体形，吞入线的长度约为从鼻尖到耳尖再到剑突的距离，其余部分留在口外，约30分钟后，轻轻抽提取出线团，用剪刀剪取线团部分，放入装有1 ml灭菌生理盐水的1.5 ml Eppendorf离心管中洗涤，取出线团放入尿素培养基，置37℃，分别在6小时、24小时后观察培养基颜色变化，变红色为脲酶试验阳性。Ep-pendorf管中洗涤液经离心后，弃上清液，用沉淀提取DNA做聚合酶链反应(PCR)检测。(2)胃粘膜组织检查：将内窥镜取出的胃粘膜组织，无菌碾碎做Hp细菌培养、涂片、镜检、快速脲酶试验和PCR检测Hp基因。(3)PCR方法：检测Hp16 SrRNA基因，扩增产物电泳具有109 bp特异性条带者为阳性［1］。 二、结果 1.两种采样方法所取标本检测Hp-DNA、脲酶结果比较：56例胃病患者用两种采样方法所取的标本做PCR和脲酶试验。PCR法测Hp-DNA，胃粘膜组织阳性38例(67.86%)，采样线团阳性37例(66.07%)，两者符合率91.07%。6小时脲酶试验结果，胃粘膜组织阳性25例(44.64%)，采样线团阳性27例(48.21%)，两者符合率为89.29%。24小时脲酶试验结果，胃粘膜组织阳性31例(55.35%)，采样线团阳性32例(57.14%)，两者符合率83.92%。将以上结果做统计学处理，差异无显著性(P＞0.05)。值得注意的是吞线采样法所取标本6小时脲酶结果假阳性率为0%，24小时结果假阳性率上升为38.89%，而粘膜组织24小时脲酶结果的假阳性率则仅上升为11.11%。 2.吞线采样法检查Hp的敏感性和特异性：以胃粘膜组织和采样线团用PCR法检查Hp-DNA均阳性或两种以上方法检查均阳性为最终判断Hp阳性标准，共检出Hp阳性患者38例，将各方法作一比较，特异性以胃粘膜组织培养Hp、吞线团和胃粘膜组织6小时脲酶最高，达100%，其次为吞线团PCR法检查Hp-DNA，为94.44%。胃粘膜组织用PCR法和24小时脲酶试验其特异性均为88.89%。敏感性以吞线团和胃粘膜组织PCR法检查Hp-DNA最高，达94.74%，其次为胃粘膜组织Hp培养(89.74%)。 三、讨论 确定Hp感染最可靠的方法是做病原学检查，而做病原学检查最困难的是标本的获取，我们用采样线团直接做快速脲酶和Hp-DNA检查，可达到用内窥镜取胃粘膜组织检查的同样效果。PCR方法检查Hp-DNA基因，已有许多报道［2，3］，从胃部直接获取标本比从口腔牙斑、唾液、粪便中检查Hp-DNA更具有代表性。有报道用吞线方法做Hp培养［4］，但阳性率很低，方法繁琐，应用价值不高。用吞线采样直接检查Hp脲酶和Hp-DNA尚未见有报道。此外通过该采样法还可做Hp基因分型、空泡毒素基因、细胞毒素相关基因等方面的研究。用该法采样做6小时快速脲酶试验特异性很高，方法简便快速，尚可自测，对于基层实验室，很有实用价值。 参考文献 1Ho SA, Hoyle JA, Lewis, FA et al. Direct polymerase chain reaction test for detection of Helicobacter pylori in humans and animals. J Clin Microbiol, 1991,29：2543-2549. 2Hammar M, Tyszkiewcz A, Wadstrom T, et al. Rapid detection of Helicobacter pylori in gastric biopsy material by polymerase chain reaction. J Clin Microbiol, 1992,30：54-58. 3王继德，杨海涛，张方岱.幽门螺杆菌的核酸杂交和PCR检测进展.上海医学检验杂志，1994，9：235-237. 4Perez-Trallero E, Montes M, Alcorta M, et al. Non-endoscopic method to obtain Helicobacter pylori for culture. Lancet, 1995,345：622-623. (收稿：1997-10-30 修回：1998-02-18) | 
